sgRNA構建建議教程

1， 引物設計，https://crispr.cos.uni-heidelberg.de/；

2， 引物退火，引物稀釋到20nM，正反向引物分別取10ul混合，取0.5-1L水加熱到沸騰，混合后引物放入，自然冷卻到室溫（2-4小時）；

3， 酶切連接，取200ng質粒（不用太多，減少自連），取5ul退火的引物，T4連接酶和內切酶10×bufffer分別取0.5ul，ddH₂O補到10ul

4， PCR儀器設置程序（時間緊張可以減少循環數或者減少循環內時間）

5， 產物用于轉化；

6， PCR檢測，用sgRNA引物，配合載體上引物PCR檢測；

7， 送測序

更多信息請到官網查詢

www.yirongkekj.cn